一、试剂盒组成、储存、稳定性 试剂盒组成 保存 50 次 （DP4005） 100 次（DP4006） 抽提液 室温 50 ml 100 ml 溶液 A（蛋白酶 K） -20℃ 750 ul 1.5 ml 溶液 B 室温 5 ml 10 ml 蛋白沉淀液 室温 18 ml 36 ml 溶液 C 4℃（一个月） -20℃（长期） 25 ml 50 ml 洗脱缓冲液 EB 室温 5 ml 10 ml 纯化柱 室温 50 个 100 个 收集管（2ml） 室温 50 个 100 个 本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。 注意事项 1． 溶液 B 低温时可能出现析出和沉淀，可以在 65℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢 复澄清透明后冷却到室温即可使用。 2． 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH 值变化，各溶液使用后应及时盖 紧盖子。 二、原理简介 独特的抽提和裂解体系迅速裂解细胞（壁）和灭活细胞内核酸酶，不需 要借助玻璃珠破壁，有效保证了基因组 DNA 的完整性，经过特殊处理的纯化 柱能有效的去除杂质和腐殖酸，极大的提高了 DNA 的纯度，用本试剂盒快速 简便（1 小时内）提取基因组 DNA 纯度极高，适合做 PCR 等下游反应。 三、试剂盒特点 1． 经过特殊处理的纯化柱能有效的去除杂质和腐殖酸。 2． 兼容性强，适用于各种不同的水样. 3． 不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。 4． 快速，简捷，单个样品操作一般可在 60 分钟内完成。 5． 高纯度，OD260/OD280典型的比值达 1.7～1.9，长度可达 23kb 左右， 可直接用于 PCR，Southern-blot 和各种酶切反应。 四、注意事项（实验前必须首先阅读这部分！） 1． 所有的离心步骤均可在室温完成，使用转速可以达到13，000 rpm 的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。 溶液 B 低温容易形成沉淀，可在 65℃水浴帮助溶解。 2. 由于水样中微生物含量极少，电泳检测可以选择高灵敏度的可见光 透射仪（EP2018）或者 pgDtectTM匹克级核酸检测系统，染料可以选 择 SYBR GREEN I 或者 picoGreen。PCR 检测可以选择百泰克细菌 16S 扩增检测试剂盒（PR8801） 【赢润生物】定货热线：13787039481，0731－8912505 Email:info@yrbio.com 【赢润生物】定货热线：13787039481，0731－8912505 Email:info@yrbio.com -1- -6- 五、操作步骤 a．取水样于离心管中13000rpm以上(或者超速离心)离心10-20分钟， 倒掉上清，称取 0.1--0.3g 沉淀到干净的离心管中（如果沉淀小于 0.3g 或 0.3ml，可以不换离心管），加入 1ml 的抽提液，加入 5ul 的 溶液 A，Vortex 1-2 分钟，充分混匀后 37℃水浴 10 分钟（每隔 2-3 分钟剧烈震荡混匀）。 b．加入 100ul 溶液 B，Vortex 1-2 分钟，充分混匀后 65℃水浴 10 分钟（每隔 2-3 分钟剧烈震荡混匀）。 c．10000rpm 离心 10 分钟取上清至新的 1.5ml 离心管。 d. 加入 1/3 体积的蛋白沉淀液，充分颠倒混匀。 e. 冰浴 8 分钟，13000rpm 离心 10 分钟取上清。 f. 纯化柱的处理：在纯化柱中间加入 500ul 的溶液 C，静置 1 分钟， 10000 rpm 离心过滤，此步是为了增加柱子过滤杂质及腐殖酸的能力。 g.将步骤 e 得到的上清液加入到处理过的纯化柱中,低速离心 （2000g）过滤,收集下滤液（下滤液含有 DNA）。 h. 准确估计下滤液的体积，加入 0.6 倍体积的异丙醇，充分混匀， 13000 rpm 离心 10 分钟，小心倒掉上层悬液，倒扣离心管 2 分钟晾 干，最后用 30ul 洗脱缓冲液 EB 溶解沉淀即可。(注：如果沉淀还不 是很干净，还可以用 70%乙醇洗涤沉淀两次，最后用洗脱缓冲液 EB 溶解) 北