一、试剂盒组成、储存、稳定性 试剂盒组成 保存 50 次 （DP4031） 100 次 （DP4032） 200 次 （DP4033） 抽提液 室温 50 ml 100 ml 200 ml 蛋白酶 K （溶液 A） -20℃ 10 mg 20 mg 20 mg×2 溶菌酶 -20℃ 2.5ml 5ml 10ml 溶液 B 室温 5 ml 10 ml 20 ml 蛋白沉淀液 室温 18 ml 36 ml 72 ml 溶液 C 4℃(一 个月） -20℃ (长期) 25 ml 50 ml 100 ml 洗脱缓冲液 EB 室温 5 ml 10 ml 20 ml 纯化柱 室温 50 个 100 个 200 个 收集管 （2ml） 室温 50 个 100 个 200 个 本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。 注意事项 1． 溶液 B 低温时可能出现析出和沉淀，可以在 65℃水浴几分钟帮 助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。 2． 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH 值变化， 各溶液使用后应及时盖紧盖子。 3． 蛋白酶 K 加水溶解至终浓度为 20mg/ml。 二、原理简介 独特的抽提和裂解体系迅速裂解细胞（壁）和灭活细胞内核酸酶， 不需要借助玻璃珠破壁，有效保证了基因组 DNA 的完整性，经过特殊 处理的纯化柱能有效的去除杂质和腐殖酸，极大的提高了 DNA 的纯度， 用本试剂盒快速简便（1 小时内）提取基因组 DNA 纯度极高，适合做 PCR 等下游反应。 三、试剂盒特点 1． 经过特殊处理的纯化柱能有效的去除杂质和腐殖酸。 2． 兼容性强，适用于各种不同的土壤、粪便以及其他 soil. 3． 不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。 4． 快速，简捷，单个样品操作一般可在 60 分钟内完成。 5． 高纯度，OD260/OD280典型的比值达 1.7～1.9，长度可达 23kb 左右，可直接用于 PCR，Southern-blot 和各种酶切反应。 四、 注意事项（实验前必须首先阅读这部分！） 1.所有的离心步骤均可在室温完成，使用转速可以达到13,000 rpm 的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。 2.溶液 B 低温容易形成沉淀，可在 65℃水浴帮助溶解。 五、操作步骤 a．准确称量 0.3--0.5g 的新鲜土到干净的离心管中，加入 1ml 的抽 提液，加入 10μl 的蛋白酶 K 和 50μl 的溶菌酶，涡旋 1-2 分钟，充 分混匀后 37℃水浴 15 分钟（每隔 2-3 分钟剧烈震荡混匀）。 b．加入 100μl 溶液 B，涡旋 1-2 分钟，充分混匀后 65℃水浴 10 分 钟（每隔 2-3 分钟剧烈震荡混匀）。 c．10,000rpm 离心 10 分钟取上清至新的 1.5ml 离心管。 d. 加入 1/3 体积的蛋白沉淀液，充分颠倒混匀。 e. 冰浴 8 分钟，13,000rpm 离心 10 分钟取上清。 f. 纯化柱的处理：在纯化柱中间加入 500μl 的溶液 C，静置 1 分钟， 10,000 rpm 离心过滤 30s，弃滤液。此步是为了增加柱子过滤杂质 及腐殖酸的能力。 g. 将步骤 e 得到的上清液加入到处理过的纯化柱中,低速离心 （4000rpm 左右）过滤,收集下滤液（下滤液含有 DNA）至新的 1.5ml 离心管中。 h. 准确估计下滤液的体积，加入 0.6 倍体积的异丙醇，充分混匀， 13,000 rpm 离心 10 分钟，小心倒掉上层悬液，倒扣离心管 2 分钟晾 干，最后用 30μl 洗脱缓冲液 EB 溶解沉淀即可。(注：如果沉淀还 不是很干净，还可以用 70%乙醇洗涤沉淀两次，每次加入 1ml，最 后用洗脱缓冲液 EB 溶解)。