产品展示
淤泥基因组DNA快速提取试剂盒Ⅱ型(离心柱型)
产品编号:DP4021/DP4022/DP4023
产品价格:¥ 2000/3600/6800
产品简介:1、升级版,纯度得率更高。2、经特殊处理的纯化住能够有效的去除杂质和腐殖酸。3、兼容性强,适用于各种不同的土壤或者淤泥。4、 不需要使用有毒的苯酚,氯仿等试剂。5、 快速,简捷,单个样品操作一般可在1小时内完成,提取样本量0.3g以内。6、高纯度,260:28
一、试剂盒组成、储存、稳定性
试剂盒组成 保存 50 次
(DP4021)
100 次
(DP4022)
200 次
(DP4023)
抽提液 室温 50 ml 100 ml 200 ml
蛋白酶 K(溶液 A) -20℃ 20 mg 20 mg×2 20 mg×4
溶菌酶 -20℃ 2.5ml 5ml 10ml
溶液 B 室温 10 ml 20 ml 40 ml
蛋白沉淀液 室温 30 ml 60 ml 120 ml
溶液 C 4℃(一个月)
-20℃(长期)
25 ml 50 ml 100 ml
溶液 D 室温 5 ml 10 ml 20 ml
结合液 DB 室温 25 ml 50 ml 100 ml
去蛋白液 PE 室温 25 ml 50 ml 100 ml
漂洗液 WB 室温
15 ml 25ml 50 ml
第一次使用前按说明加指定量乙醇
洗脱缓冲液 EB 室温 5 ml 10 ml 20 ml
纯化柱 室温 50 套 100 套 200 套
吸附柱 AC 室温 50 套 100 套 200 套
本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。
注意事项
1. 溶液 B 低温时可能出现析出和沉淀,可以在 65℃水浴几分钟帮助重新溶解,恢
复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH 值变化,各溶液使用后应及时盖
紧盖子。
二、原理简介
独特的抽提和裂解体系迅速裂解细胞(壁)和灭活细胞内核酸酶,不需
要借助玻璃珠破壁,有效保证了基因组 DNA 的完整性,经过特殊处理的纯化
柱能有效的去除杂质和腐殖酸,极大的提高了 DNA 的纯度,用本试剂盒快速
简便(1 小时内)提取基因组 DNA 纯度极高,适合做 PCR 等下游反应。
三、试剂盒特点
1. 经过特殊处理的纯化柱能有效的去除杂质和腐殖酸。
2. 兼容性强,适用于各种不同的淤泥、粪便以及其他 soil.
3. 不需要使用有毒的苯酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。
4. 快速,简捷,单个样品操作一般可在 60 分钟内完成。
5. 高纯度,OD260/OD280典型的比值达 1.7~1.9,长度可达 50kb 以上,
可直接用于 PCR,Southern-blot 和各种酶切反应。
四、注意事项(实验前必须首先阅读这部分!)
1. 所有的离心步骤均可在室温完成,使用转速可以达到13,000 rpm
的传统台式离心机,如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
溶液 B 低温容易形成沉淀,可在 65℃水浴帮助溶解。
2. 请自备 70%乙醇
3.样品必须是新鲜采样或保存于-80℃,样品不能常温保存时间过长。
【百泰克生物】定货热线:010-62951781,85640667 Email:info@bioteke.com 【百泰克生物】定货热线:010-62951781,85640667 Email:info@bioteke.com
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五、操作步骤
a.准确称量 0.1--0.3g 的新鲜样品到干净的离心管中,加入 1ml 的抽提液,加
入 10ul 的蛋白酶 K 和 50ul 的溶菌酶,Vortex 2-3 分钟,至到颠倒混匀离心管
时,土样不会聚在管底或轻弹即可散开,充分混匀后 37℃水浴 20 分钟(水浴时,
每隔 1-2 分钟震荡混匀,使土样均匀散开,不聚在管底为好)。
b.加入 200ul 溶液 B,Vortex 2-3 分钟,充分混匀后 65℃水浴 10 分钟(水浴
时,每隔 1-2 分钟震荡混匀,使土样均匀散开,不聚在管底为好)。
c.13000rpm 离心 10 分钟取上清至新的 1.5ml 离心管。
d. 加入 1/2 体积的蛋白沉淀液,充分颠倒混匀。
e. 冰浴 8 分钟,13000rpm 离心 10 分钟取上清。
f.在上清液加入 500ul 的溶液 C,充分颠倒混匀。
g.将步骤 f 得到的混合液加入到纯化柱中, 10000rpm 离心 1 分钟过滤,收集下滤
液(下滤液含有 DNA)。混合液体积大,应该分两次过滤。
h. 准确估计下滤液的体积,加入 0.6 倍体积的异丙醇,充分混匀,13000 rpm 离心 10 分钟,小心倒掉上层悬液,沉淀倒扣吸水纸 2 分钟。
i.用 100ul 溶液 D 充分溶解沉淀,加入 5 倍体积的结合液 DB,上下颠倒混匀,
将混合液倒入吸附柱中,静置 1 分钟,13000rpm 离心 1 分钟,弃下液。
j.在吸附柱中加入 500ul 的去蛋白液 PE,13000rpm 离心 1 分钟,弃下液。
k. 在吸附柱中加入 700ul 的漂洗液 WB,13000rpm 离心 1 分钟,弃下液。在吸
附柱中加入 500ul 的漂洗液 WB,13000rpm 离心 1 分钟,弃下液。将吸附柱重新
放回套管中,13000rpm 离心 3-4 分钟。
l.将吸附柱转移至新的 1.5ml 离心管中,在吸附柱的中间加入 30-50ul 的洗脱
缓冲液 EB,13000rpm 离心 1 分钟洗脱 DNA,可立即用于下游分子生物学实验或
-20℃保存。