F-TOP10快速转化感受态细胞产品说明书 

产品规格

F-TOP10：                                             10×100μl

pUC19（control vector）：10pg/μl             10μl

保存条件：-80℃ 

基因型

F^- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 araΔ139Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL (Str^r)endA1 nupG

产品说明

TOP10菌株来源于MC1061，是目前实验室最常用的感受态细胞之一，基因型与DH10B高度类似 (DH10B为galE15型，而TOP10为galU型)。TOP10生长速度快，37℃，10小时可见克隆。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。可用于构建克隆，蓝白斑筛选等实验。

F-TOP10感受态细胞经特殊工艺制作，无需42℃热激，37℃孵育步骤，只需冰浴，10min内完成转化、涂板操作，pUC19质粒检测转化效率可达1~5×10⁸ cfu/μg DNA。

快速转化操作方法 (10min)

1. 提前15分钟将用到的筛选培养基平板拿到37℃预热

2. F-TOP10感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀,，冰中静置5分钟。

3. 用200μl枪将感受态细胞-DNA混合物转移到已经37℃预热的2YT或LB培养基上。

4. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少13 h。

快速热激转化操作方法 (25min,可提高转化效率)

1. F- TOP10感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA (质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀,，冰中静置5分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟 (晃动会降低转化效率)。加入700 μl 不含抗生素的LB，37℃，200 rpm 复苏10分钟，涂板 (均匀，表面无水渍)。

3. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15h。

注意事项

1. F-TOP10快速转化感受态细胞也可进行热激操作，对于>7 kb质粒的构建，为了提高转化效率可按以下步骤操作：F-TOP10感受态细胞从-80℃拿出，插入冰中，5分钟后，加入目的DNA并用手拨打EP管底轻轻混匀，冰中静置20分钟。42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中静置2分钟。加入700 μl LB，37℃，200 rpm复苏30分钟，涂板。

2. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率，混入目的DNA时应轻柔操作。

3. F- TOP10快速转化感受态细胞涂氨苄/羧苄青霉素抗性平板时效率较高，若涂卡那霉素或其他抗生素平板，转化效率下降(因无孵育步骤，卡那霉素等对菌体毒性较大)。若要提高卡那霉素或其他抗性质粒的转化效率，可按热激转化操作，增加孵育步骤。