基因型

Agrobacterium rhizogenes (str^R,Cam^R ) Ar Qual Ri (agropine type)

产品说明

发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的一种革兰氏阴性土壤细菌，它能够感染

大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。Ar Qual发根农杆菌菌株含有农杆碱型Ri质粒，具有

广泛的宿主范围（玉米，烟草，番茄，柑橘等），同时具有链霉素，氯霉素抗性。唯地生物开发的Ar Qual发

根农杆菌电转感受态特别适用于大质粒的转化：经pCAMBIA2301质粒 (size:11633 bp)检测转化效率>10⁵ 

cfu/μg DNA；经pCAMBIA2301-ZH质粒（size:40 kd）检测转化效率可达5×10³ cfu/μg DNA。

常规操作方法

1. 0.1 cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟，待其沥干水分，正置5分钟，使乙醇充分

挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟充分

降温。

2. 取-80℃保存的农杆菌感受态插入冰中5分钟，待其融化，加入1-5 μg质粒DNA（质粒体积不大于6ul，最好用

试剂盒抽提，双蒸水溶解），用手拨打管底混匀，立即插入冰中，用200 μl枪头将感受态-质粒混合物快速移到电

击杯中，盖上杯盖，空管保留待用。

3. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 ohm，V=2400 V（此参数为Biorad 推荐，使用者也可按所用电

转仪推荐的protocol操作），将电击杯从冰中拿出，吸水纸吸干外表面水份，快速放入电转槽中，启动电击，电

击完成快速插入冰中，加入1 ml无抗生素的TY，并转移到感受态空管中，28℃振荡培养2~3小时。

4. 6000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的TY平板上，倒置放于

28℃培养箱培养2-3天

● TY配方（1L）：

Tryptone                5g

Yeast extract          3g

补水到1L体积，完全溶解后，121度、20分钟高温灭菌

配制1M的氯化钙水溶液，121度、20分钟高温灭菌

每1L 灭菌的TY液体营养液中加入10ml 无菌的1M氯化钙水溶液即可。

若配制TY固体培养基，则加入15g 琼脂粉。

注意事项

1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。

2. 电转感受态细胞中不可混入气泡，转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

3. 平板上阳性克隆密度过大时，由于营养不足，阳性克隆生长变慢，菌落变小，为了获得大的菌落，应减少质粒用量或最终用于涂板的菌量。

4.  Ar Qual具有链霉素、氯霉素抗性，不可用于具有链霉素抗性或氯霉素抗性质粒的转化。