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如何提高化学转化的效率
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用于转化的DNA应纯化,并重悬于水中或TE缓冲液里;
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加入DNA体积不超过感受态细胞体积的1/10;
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对于纯化超螺旋pUC19,100 pg~1 ng的用量时转化效率最高,但加大DNA用量可提高总克隆数;
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细胞最好在冰上解冻,
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管中的最后一点冰融化后,立即加入DNA;
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温度高于0°C时,转化效率就开始下降;
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加入DNA后冰育30分钟。预计每缩短10分钟,转化效率会有2倍左右的损失;
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热激的温度和时间取决于转化体积和离心管壁的厚度,通常为42℃孵育30~90秒;
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热激后在37°C复苏1小时转化效率最佳。预计每缩短15分钟,转化效率会有2倍左右的损失;
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加入SOC比LB培养基的转化效率高约2倍;
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复苏时振荡试管可使转化效率提高2倍。