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TEM样品包埋块制作有关注意事项
一、取材与运输：
1、动作迅速：组织离体后，应将其快速放入固定液中，使组织细胞 尽可能保持原来的生活状态，在空气中暴露的时间越长，对结果的 影响就越大。细胞悬浮液离心，弃上清，PBS清洗2次，加入固定液4度 固定。注意取材的原则：尽量快（停止血供1min内放入固定液中）
、组织块小（1mm厚度）、4度条件下取材、固定液体积理论上为样 本体积的20倍以上。4度固定一天后，寄送。
2、减少损伤：选择锋利切割器械，减少牵拉或挤压组织；
3、组织大小与细胞量：组织尽量切成1mm3大小，如果无相关工具 ，我公司可代为切小。但请将目标区域切得尽量小，防止我们修样 时，选取的区域与您观察的不一致。如果检测标本为细胞，一般细胞量达到10的7次方，呈肉眼可见的团状。若细胞太少，对结果可能 会产生影响。
4、运输事项：将组织或者细胞完全浸泡在2.5%戌二醛中4度运输，
要保证完全浸泡，样品容器中的空气越少越好。
透射电镜样品制作扭作流程
1) 取材
2) 漂洗（生理盐水）
3) 前固定（2.5%戌二醛，4°C冰箱2小时以上）
1) 漂洗（0.1M嶙酸缓冲液，3次，45分钟）
2) 后固定（1%锇酸1小时左右）
3) 漂洗（0.1M磷酸缓冲液， 3次，45分钟）
4) 块染（1%醋酸铀2小时）
5) 梯度脱水（50%、 70%、 80%、 90%、 100% 丙酮各 15分钟，100% 2次，各10分钟）
6) 浸透（丙酮：包埋液=1 : 1， 37°C烘箱2
小时；丙酮：包埋液=1 : 4， 37C烘箱过夜；纯包埋液 45C烘箱2小时）
7) 包埋聚合（45 C烘箱3小时，65 C烘箱48小时）
8) 修块
9) 半薄切片光镜定位
10) 挑选并清洗好载网，在载网上覆盖支持膜
11) 超薄切片
戌二醛固定液的配置
(a)磷酸缓冲液的配方：
A液：0.2M磷酸氢二钠贮备液：
Na2HPO4-2H2O 或：Na2HP04.7H20 或：Na2HP04.12H20
加双蒸水至 500毫升
B液：0.2M磷酸二氢钠贮备液
NaH2PO4 • H2O 13.8 克
或：NaH2P04 • 2H20 15.61 克
加双蒸水至 500毫升
使用时将A液40.5ml和B液9.5ml混合成0.2嶙酸缓冲液。（PH7.4)
(b) 2.5%戌二醛固定液的配方：
0.2M磷酸缓冲液 50毫升
25%戌二醛溶液（电镜专用） 10毫升
加双蒸水至 100毫升
戌二醛溶液最终浓度：pH值7.3-7.4
1、动作迅速：组织离体后，应将其快速放入固定液中，使组织细胞 尽可能保持原来的生活状态，在空气中暴露的时间越长，对结果的 影响就越大。细胞悬浮液离心，弃上清，PBS清洗2次，加入固定液4度 固定。注意取材的原则：尽量快（停止血供1min内放入固定液中）
、组织块小（1mm厚度）、4度条件下取材、固定液体积理论上为样 本体积的20倍以上。4度固定一天后，寄送。
2、减少损伤：选择锋利切割器械，减少牵拉或挤压组织；
3、组织大小与细胞量：组织尽量切成1mm3大小，如果无相关工具 ，我公司可代为切小。但请将目标区域切得尽量小，防止我们修样 时，选取的区域与您观察的不一致。如果检测标本为细胞，一般细胞量达到10的7次方，呈肉眼可见的团状。若细胞太少，对结果可能 会产生影响。
4、运输事项：将组织或者细胞完全浸泡在2.5%戌二醛中4度运输，
要保证完全浸泡，样品容器中的空气越少越好。
透射电镜样品制作扭作流程
1) 取材
2) 漂洗（生理盐水）
3) 前固定（2.5%戌二醛，4°C冰箱2小时以上）
1) 漂洗（0.1M嶙酸缓冲液，3次，45分钟）
2) 后固定（1%锇酸1小时左右）
3) 漂洗（0.1M磷酸缓冲液， 3次，45分钟）
4) 块染（1%醋酸铀2小时）
5) 梯度脱水（50%、 70%、 80%、 90%、 100% 丙酮各 15分钟，100% 2次，各10分钟）
6) 浸透（丙酮：包埋液=1 : 1， 37°C烘箱2
小时；丙酮：包埋液=1 : 4， 37C烘箱过夜；纯包埋液 45C烘箱2小时）
7) 包埋聚合（45 C烘箱3小时，65 C烘箱48小时）
8) 修块
9) 半薄切片光镜定位
10) 挑选并清洗好载网，在载网上覆盖支持膜
11) 超薄切片
戌二醛固定液的配置
(a)磷酸缓冲液的配方：
A液：0.2M磷酸氢二钠贮备液：
Na2HPO4-2H2O 或：Na2HP04.7H20 或：Na2HP04.12H20
加双蒸水至 500毫升
B液：0.2M磷酸二氢钠贮备液
NaH2PO4 • H2O 13.8 克
或：NaH2P04 • 2H20 15.61 克
加双蒸水至 500毫升
使用时将A液40.5ml和B液9.5ml混合成0.2嶙酸缓冲液。（PH7.4)
(b) 2.5%戌二醛固定液的配方：
0.2M磷酸缓冲液 50毫升
25%戌二醛溶液（电镜专用） 10毫升
加双蒸水至 100毫升
戌二醛溶液最终浓度：pH值7.3-7.4