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细胞凋亡发生时,染色体DNA以核小体为单位发生降解,细胞核浓缩,碎裂的核物质被胞膜包裹游离出细胞外,成为凋亡小体。这些特征性变化可以通过显微镜直接观察,或用某些荧光染料染色后,在荧光显微镜下观察,或进行流式细胞分析。然而这些特征通常难以与坏死细胞进行准确区分。
凋亡早期阶段,细胞膜虽然能够维持结构的完整,但丧失了其磷脂分子分布的非对称性,导致细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine, PS)翻转到细胞膜外侧,使凋亡细胞易被吞噬细胞识别。通过对膜上的磷脂酰丝氨酸进行染色即可区分正常细胞与凋亡细胞,再进一步对核进行染色,由于有完整结构的膜屏障,凋亡细胞的核无法被染色,而坏死细胞可以被染色,这样就准确地区分了凋亡细胞和坏死细胞。细胞凋亡时,伴随一系列蛋白酶学的改变,多种Caspase活性变化参与凋亡的启动、执行过程。检测Caspase活性变化,是分析凋亡发生机制和特征的另一方法。某些情况下,凋亡细胞不具有全部的凋亡特征,例如特征性的DNA片段化不明显,而出现DNA随机降解;有时Caspase活性的改变与凋亡不相关,即凋亡时Caspase活性不变,而Caspase活性变化但无凋亡发生。总的来说,观察凋亡时,应该观察反映凋亡不同特征的几个指标,综合分析。
GenStar公司提供四种适合于荧光显微镜和流式细胞分析的凋亡检测试剂盒,分别针对细胞凋亡的不同特征性指标,操作简单快速,稳定可靠。StarGlow Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit(Cat. No. C203-01,02)和StarGlow Annexin V-EGFPApoptosis Detection Kit(Cat. No. C201-01)检测暴露在胞膜外的PS和凋亡细胞特征性核形态改变,灵敏度高、特异性强。StarGlow Fluorescent Staining Apoptosis Detection Kit(Cat. No. C202-01)通过对染色体DNA直接染色区分不同的细胞状态,操作简便快速、价格低廉,但特异性稍差。StarGlow One-step TUNEL Kit(Cat.No. C204-01)针对凋亡细胞特征性DNA片段化现象,灵敏度高、特异性好、适用范围广。建议将2~3种上述试剂盒结合使用,同时检测同一样品的不同指标,便于对凋亡进行客观评价。